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本文目录
- 核酸检测的原理是什么DNA和RNA怎么区分什么是假阴性
- 核酸的种类,单位,组成成分,dna,和rna的异同
- 生化知识点17:核酸(DNA、RNA)一级结构的测定
- PCR中的目的基因是DNA还是RNA
- 核酸可分为DNA和RNA的主要依据是什么
核酸检测的原理是什么DNA和RNA怎么区分什么是假阴性
如今，疾病越来越复杂多样，而疾病的检测以及甄别对于治疗来说就显得至关重要了，就拿这次新冠肺炎的爆发来说，其中“核酸检测”这种医学检测手段就进入了大众的视野。那么，核酸检测技术的原理是什么？为什么核酸检测会有的一定几率出错？什么是假阴性？
核酸。核酸作为一个比较大的概念，分为脱氧核糖核酸，以及核糖核酸，其中脱氧核糖核酸是我们日常生活中所说的基因，即DNA，一般以细胞为单位的生命体的遗传信息都是以脱氧核糖核酸的形式被储存在DNA里的，但是病毒的遗传方式有所不同，比如有一部分病毒是以脱氧核糖核酸为遗传物质的（乙肝病毒）。
但是普遍的DNA病毒致病性不同，一般常见的致病性病毒的遗传物质是一种叫做RNA的物质，即核糖核酸。
总之，核酸就是在细胞核里面的一类生物聚合物，是遗传物质的最小单位核苷酸或者碱基所组成的序列，参与着遗传物质保存、繁殖等生化合成和细胞代谢，决定着细胞或机体的性状表现。
自1953年DNA双螺旋结构的发现，正式开启了分子生物学时代，使人类对病原体的研究从形态学层次深入到了分子层次，而核酸检测技术就是基于分子水平的一项检测技术。
核酸检测技术简单来说，由于每一个生物的核酸是不一样的，因此可以通过分析致病微生物核酸内部的基因学序列，来确定生物体上是否携带有病毒。
核酸检测技术是基于核酸双链互补配对原则的核酸杂交技术，首先合成一段与特定病原体DNA或者RNA互补的单链核酸序列作为探针，并用生物素、放射性同位素、酶等进行标记，然后与待测病原体的核酸进行杂交。如果探针能与待测病原体的核酸互补配对，便能观察到标记物的信号，以此来证实待测病原体的种类。
当探针与病原体核酸互补结合后，探针上的标记物便会显色，研究人员就通过观察病原体样本是否显色来确定病原体的种类，但是有时候会因为患者体内的病原体核酸含量过低，检测时会有一定的难度。
直到20世纪八九十年代，PCR技术的出现才大大提高了核酸检测技术的应用性和准确性。核酸检测技术不必预先对病原体进行分离培养便可直接检测，方便快捷，而且特异度和灵敏度均较高，对感染性疾病的早期诊断有至关重要的意义。
对于核酸检测的价格各个地方略有不同，一般做一次核酸检测可能需要200到300元左右，一般24小时内就可以得出结果。
虽然核酸检测技术已经相当成熟，但自新冠肺炎疫情发生以来，关于核酸检测的假阴性率过高的这个话题，一直都是各方关注的焦点。
比如在北京大学国际医院一名急诊护士在6月18日确诊感染新冠肺炎，但6月17日她曾参加的核酸检测结果却为阴性，这个结果也让众人对核酸检测技术提出了质疑。
假阴性、假阳性假阳性是指本来的阴性样品结果检测为了阳性，即错检；假阴性是指本来的阳性样品检测为阴性，即漏检。
实际上，从技术角度上来说，核酸检测过程中出现的“假阴性”是不可避免的，比如有项研究就发现，新冠患者在感染期间至少会有20%的漏诊概率，即会出现假阴性结果。虽然核酸检测技术会有假阴性的问题出现，但我们对于核酸假阴性也不能掉以轻心。
核酸的种类,单位,组成成分,dna,和rna的异同
种类：脱氧核糖核酸（DNA）、核糖核酸（RNA）。
单位：核苷酸：（DNA：脱氧核苷酸；RNA：核糖核苷酸）。
组成成分：磷酸、碱基、五碳糖。
DNA与RNA的异同
同：都是核酸，基本单位都是核苷酸，都与遗传有关。
异：
存在：DNA主要存在于细胞核，RNA主要存在于细胞质；
结构：DNA是双链，RNA是单链；
组成单位：DNA为脱氧核苷酸，RNA为核糖核苷酸；
生化知识点17:核酸(DNA、RNA)一级结构的测定
核酸（DNA、RNA）一级结构的测定方法
一、DNA一级结构的测定
DNA一级结构的测定主要包括以下几种方法：
末端终止法（Sanger双脱氧法）
原理：ddNTP（双脱氧核苷酸）参入可导致DNA复制的末端终止。
步骤：进行四组平行反应，每组反应混合物含有四种ddNTP，但其中一种ddNTP的量较少。
在DNA合成过程中，聚合酶多数情况下使用正常的核苷酸，使DNA链正常延伸；但有时也会使用ddNTP，导致DNA链在该位置终止。
每组反应中，ddNTP的随机插入会留下一系列长度不等的、以该双脱氧核苷酸结尾的DNA链。
对每组反应混合物进行凝胶电泳，片段越短，迁移速度越快，越靠近凝胶底部。
从凝胶底部向上读出序列，并将读出的序列转化成互补链的序列。
图示：
化学断裂法（Maxam-Gilbert法）
原理：使用特殊化学试剂处理待测的具有末端放射性同位素标记的单链DNA或只有一条链末端被标记的双链DNA片段，造成特定碱基的修饰、脱落和戊糖-磷酸骨架被特异性切割，产生长度不同的DNA链降解产物。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出DNA序列。
步骤：进行四组平行反应，分别针对G、A+G、C+T和C进行特异性剪切，然后进行凝胶电泳和放射自显影。
图示：
焦磷酸测序
原理：在同一反应体系中，由4种特异性酶催化的级联化学发光反应发生。每轮测序反应中只加入一种dNTP，若该dNTP与模板配对，聚合酶将其掺入引物链的3′端并释放等量PPi。PPi转化为可见光信号，形成峰值，峰值高度与掺入的核苷酸数目成正比。
步骤：每轮反应结束后，加入下一种dNTP，继续下一轮DNA链的合成。
图示：
深度测序
原理：基于高通量测序技术，可对数百万个DNA分子同时进行测序，操作简便，成本和时间大大节约。
方法：如单分子测序法等。
二、RNA一级结构的测定
RNA一级结构的测定方法主要包括：
逆转录法
原理：使用逆转录酶将待测RNA逆转录成cDNA，再利用末端终止法等方法测定cDNA序列，从而推断出RNA序列。
化学或酶学消化法
原理：用化学或酶学方法对放射性同位素标记的RNA进行部分消化，再进行聚丙烯酰胺电泳分析，根据电泳结果推断RNA序列。
质谱法
原理：利用质谱技术对RNA分子进行质量测定，通过分析质量谱图推断RNA序列。
综上所述，核酸（DNA、RNA）一级结构的测定方法多种多样，每种方法都有其独特的原理和步骤，可根据具体实验需求选择合适的方法进行测定。
PCR中的目的基因是DNA还是RNA
是DNA。
PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5端到3端进行复制，也就是只能识别3的尾端，而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上，所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部，就是末尾是3端的那一边结合，为那些脱氧核苷酸提供3的末端，就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。
你要做翻转录PCR使用的引物也会是DNA，因为DNA要比RNA稳定很多，并且PCR的原理是依照半保留复制的原理进行的。
核酸可分为DNA和RNA的主要依据是什么
核酸（nucleic acid）是重要的生物大分子，它的构件分子是核苷酸（nucleotide）。
天然存在的核酸可分为：
╭脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）
╰核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）
DNA贮存细胞所有的遗传信息，是物种保持进化和世代繁衍的物质基础。
RNA中参与蛋白质合成的有三类：
╭转移RNA（transfer RNA，tRNA）
∣核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）
╰信使RNA（messenger RNA，mRNA）
20世纪末，发现许多新的具有特殊功能的RNA，几乎涉及细胞功能的各个方面。
核苷酸可分为：
╭核糖核苷酸：是RNA的构件分子
╰脱氧核糖核苷酸：是DNA构件分子。
细胞内还有各种游离的核苷酸和核苷酸衍生物，它们具有重要的生理功能。
核苷酸由：
╭核苷（nucleoside）
╰磷酸（Phosphonic.acid）
核苷由：
╭碱基（base）
╰戊糖（Pentose）
碱基（base）：
构成核苷酸中的碱基是含氮杂环化合物，由嘧啶（pyrimidine）和嘌呤（purine）构成。
核酸：
╭嘌呤碱：
╭腺嘌呤
∣╰鸟嘌呤
╰嘧啶碱：
╭胞嘧啶
∣胸腺嘧啶
╰尿嘧啶
╭ DNA中含有腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶，胸腺嘧啶主要存在于DNA中。
∣
╰ RNA中含有腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶，尿嘧啶主要存在于RNA中。
在某些tRNA分子中也有胸腺嘧啶，少数几种噬菌体的DNA含尿嘧啶而不是胸腺嘧啶。这五种碱基受介质pH的影响出现酮式、烯醇式互变异构体。
在DNA和RNA中，尤其是tRNA中还有一些含量甚少的碱基，称为稀有碱基（rare bases）稀有碱基种类很多，大多数是甲基化碱基。tRNA中含稀有碱基高达10%。
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